多壁碳纳米管致人肝癌细胞HepG2毒性及代谢酶表达变化

赵琢¹，柳明¹，杨磊¹，刘伟¹，王华¹，刘美玲²，张秀霞²，申敬²，张园¹

1. 天津海关工业产品安全技术中心2. 天津科技大学生物工程学院

摘 要：采用实时无标记细胞分析系统研究多壁碳纳米管（MWCNTs）对人肝癌细胞HepG2毒性作用,确定MWCNTs是否会影响肝脏代谢酶谷胱甘肽S转移酶P1（GSTP1）和细胞色素P450亚酶CYP1A1的表达。利用0.12、0.25、0.5、1和2 mg/mL的MWCNTs处理HepG2细胞24、48和72h后,采用噻唑蓝比色法（MTT）测定MWCNTs对肝癌细胞HepG2增殖的抑制作用。利用实时无标记动态细胞分析（RTCA）系统动态监测不同剂量（0.25、0.5、1 mg/mL）MWCNTs对HepG2细胞生长的影响。细胞经MWCNTs处理48 h后,实时定量荧光PCR（RT-PCR）和蛋白质印迹法（Western Blot）检测肝脏代谢酶GSTP1和CYP1A1的mRNA水平和蛋白水平的变化情况。结果显示MWCNTs可以抑制HepG2细胞的增殖,且呈一定的剂量和时间依赖性。实时无标记细胞分析法能够准确监测MWCNTs对细胞增殖的过程,并且能避免多壁碳纳米管材料对数据的干扰。经MWCNTs处理后的细胞中肝脏代谢酶GSTP1mRNA水平和蛋白水平上调,而CYP1A1的mRNA水平和蛋白水平显著下降。

关键词：多壁碳纳米管;HepG2细胞;毒性研究;实时无标记细胞分析技术;肝脏代谢酶;