磁性可再生性固定化酶制备及其在微波辅助蛋白酶解中的应用
来源期刊：桂林理工大学学报2014年第4期
论文作者：韦美苹 庞玉凤 陈正毅 苏日辉 杜甫佑 阮贵华
文章页码：748 - 754
关键词：磁性粒子;固定化酶;木瓜蛋白酶;黑蚂蚁蛋白;
摘 要：将磁性可再生性固定化酶应用于微波辅助蛋白酶解。包覆了Si O2的Fe3O4磁性粒子（Fe3O4@m Si O2）表面经3-（2,3-环氧丙氧）丙基三甲氧基硅烷偶联剂（GLYMO）与亚氨基二乙酸（IDA）反应的产物（GLYMO-IDA）修饰,加入Cu2+形成金属螯合配体后利用Cu2+与木瓜蛋白酶作用固定木瓜蛋白酶。在优化条件下,获得的固定化酶酶活为1 158.8 U,酶活保留率达44.1%。所获得的固定化木瓜蛋白酶具有易再生、再生后酶活稳定的特点。再生5次后酶活平均值为1 014 U,再生率达88%。HPLC分析表明,微波辅助结合固定化可再生酶可用于黑蚂蚁蛋白的快速酶解,获得的色谱图轮廓与自由酶酶解结果相似。酶解过程快,多肽丰富且易与底物分离,表明可再生固定化酶结合微波辅助有助于蛋白的酶解与多肽的制备。
韦美苹，庞玉凤，陈正毅，苏日辉，杜甫佑，阮贵华
桂林理工大学化学与生物工程学院
摘 要：将磁性可再生性固定化酶应用于微波辅助蛋白酶解。包覆了Si O2的Fe3O4磁性粒子（Fe3O4@m Si O2）表面经3-（2,3-环氧丙氧）丙基三甲氧基硅烷偶联剂（GLYMO）与亚氨基二乙酸（IDA）反应的产物（GLYMO-IDA）修饰,加入Cu2+形成金属螯合配体后利用Cu2+与木瓜蛋白酶作用固定木瓜蛋白酶。在优化条件下,获得的固定化酶酶活为1 158.8 U,酶活保留率达44.1%。所获得的固定化木瓜蛋白酶具有易再生、再生后酶活稳定的特点。再生5次后酶活平均值为1 014 U,再生率达88%。HPLC分析表明,微波辅助结合固定化可再生酶可用于黑蚂蚁蛋白的快速酶解,获得的色谱图轮廓与自由酶酶解结果相似。酶解过程快,多肽丰富且易与底物分离,表明可再生固定化酶结合微波辅助有助于蛋白的酶解与多肽的制备。
关键词：磁性粒子;固定化酶;木瓜蛋白酶;黑蚂蚁蛋白;
